欢迎来到CSNpharm!产品仅用于科研!

400-920-2911 sales@csnpharm.cn

0

您的位置: 首页 / 抗生素 / 潮霉素B

CAS No.: 31282-04-9

潮霉素B

潮霉素B(Hygromycin B)是由吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素,通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成,从而杀死原核(如细菌)、真核(如酵母菌、真菌)和高等哺乳动物真核细胞。

规格 价格 库存
250mg RMB 465 产品咨询
1g RMB 900 产品咨询
5g RMB 2970 产品咨询

描述

潮霉素B(Hygromycin B)是由吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素,通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成,从而杀死原核(如细菌)、真核(如酵母菌、真菌)和高等哺乳动物真核细胞。

大肠杆菌来源的潮霉素抗性基因hyg或hph,可编码潮霉素B磷酸转移酶,将潮霉素B转化成不具有生物活性的磷酸化产物,从而起到解毒作用。因此,潮霉素B可作为一种选择性标记来筛选和维持培养成功转染潮霉素抗性基因的原核或真核细胞。

此外,由于作用模式的差异,常与G418 (Geneticin),Zeocin和Blasticidin S联合使用进行双抗性阳性细胞株的选择。因可选择性渗透进入因病毒感染而通透性增强的细胞,且能抑制翻译,潮霉素B也可用作抗病毒剂。

保存条件

固体2℃-8℃或-20℃均可保存,保存时注意避光,至少三年有效。固体在37℃时可稳定一个月。 存储液4℃或-20℃避光保存,有效期半年。-20℃溶液应避免反复冻融。<2 mg/mL的工作液4℃避光可稳定一个月。

使用方法

潮霉素B可用来筛选稳转细胞株的工作浓度需要根据细胞类型、培养基、生长条件和细胞代谢率而变化,推荐使用浓度为50 - 1000 µg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(Kill curve),即剂量反应性曲线,来确定最佳筛选浓度。一般而言,哺乳动物细胞对潮霉素B的敏感浓度范围为50 - 500 µg/mL,细菌或植物细胞为20 - 200 µg/mL,真菌为300 - 1000 µg/mL。 1、杀死曲线的确立: (1) 将未转染的细胞按照20 - 25%的细胞密度铺在合适的培养板上,37℃孵育过夜。 (2) 根据细胞类型,设定合适范围的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例,可设定50,100,250,500,750,1000 µg/mL,每个浓度至少做三个平行孔。 (3) 24h后继续更换新鲜的筛选培养基,并观察细胞存活率。 (4) 此后根据细胞生长状态,约2 - 3天更换新鲜的筛选培养基。 (5) 定期(如每一天或每两天)进行活细胞计数来确定抑制未转染细胞生长的适当浓度。一般选择在7 - 10天内能够杀死绝大多数细胞的最低浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。 2、转染细胞株筛选: (1) 细胞转染含有hyg或hph基因的质粒48h后,将细胞置于含有适当浓度潮霉素B(一般最低浓度为杀死曲线确定的最低浓度)的新鲜培养基中培养。 注意:当细胞处于分裂活跃期时,抗生素作用最明显。细胞过于密集,抗生素产生的效力会明显下降。最好进行细胞分盘使其密度不超过25%。 (2) 每隔2 - 3天,移除和更换含有潮霉素B的培养基。 (3) 筛选7天或更长时间后评估细胞形成细胞集群的情况,这依赖于宿主细胞系和转染筛选效率。 (4) 转移和放置5 - 10个抗性克隆到直径35 mm的培养皿中,用选择培养基继续培养7天。 (5) 之后更换正常培养基培养即可。

注意

1.潮霉素B为有毒化合物,操作时请小心拿放,穿实验服并佩戴一次性手套。 2.配制存储液时,须使产品完全溶解后再进行过滤除菌,否则过滤时会有药物损失。 3.本产品不可进行高压灭菌。 4.本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床、食品或药品,不得存放于普通住宅内。

大规格询价

号为必填项

姓名: 邮箱: 手机号:
留言:
   提交
联系
我们