硫酸遗传霉素是一种结构类似于庆大霉素B1（Gentamycin B1）的氨基糖苷类抗生素，通过影响80S核糖体功能和阻断延伸步骤来干扰蛋白合成，对原核和真核等细胞都有毒性，包括细菌、酵母、高等植物和哺乳动物细胞，也包括原生动物和蠕虫。其抗性基因（主要为Neo基因）位于转座子Tn601（903）或Tn5（来源于细菌），但是可以在真核细胞中表达。通过基因重组技术将这些抗性基因导入细胞，使其获得对G418的耐药性，从而用来筛选和维持培养携带抗性基因的原核或者真核细胞。

哺乳动物细胞中，当抗性基因Neo被整合进真核细胞基因组后，使其编码表达氨基糖苷磷酸转移酶。此酶通过共价修饰遗传霉素的氨基或羟基功能，抑制抗生素和核糖体间的相互作用，从而使得抗生素失活。这一特性赋予细胞产生抗性。稳转细胞株筛选实验，需要建立剂量反应曲线确定杀死无抗性细胞的最低有效浓度。

植物细胞中则一般通过转染携带NptII基因的抗性质粒赋予细胞抗性。nptII基因也能编码表达氨基糖苷磷酸转移酶，这个酶使得多种抗生素丧失活性，包括遗传霉素、卡那霉素和巴龙霉素。因此，硫酸遗传霉素常用于筛选表达特定抗性基因的稳定细胞株。

固态粉末-20℃避光保存，有效期三年。应避免受潮，否则会降低抗生素活力。配制成溶液后，分装并于-20℃避光保存，两年有效，避免反复冻融。

1. 细胞转染含抗性基因的质粒48h后，用含有适宜浓度硫酸遗传霉素的新鲜培养基将细胞传代（注：细胞处于活跃分裂期时抗生素工作最好。细胞密度太高，抗生素效率降低。细胞分盘时覆盖率最好不超过25%）。 2. 每3 - 4天用含抗生素的新鲜培养基换液。 3. 7天后检测细胞集落形成。根据宿主细胞种类和转染或筛选效率，集落形成可能需要增加一周或更久。 4. 转移5 - 10个抗性克隆到35 mm细胞培养板中，继续加入含抗生素的培养基维持培养7天（随后可用细胞毒性实验进行检测）。 5. 之后更换正常培养基培养即可。